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主要水生动物疫病病原学及检疫技术研究——深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心研究成果

2014-12-24

我国是世界水产养殖产量最多的国家之一,水产养殖业在我国农业生产中占有举足轻重的地位,同时,水产贸易也是我国农业创汇的重要支柱。深圳毗邻香港,是连接国际和国内的重要枢纽,每天有大量的水产品通关,因此深圳口岸也是重要水生动物疫病传入和传出的高风险地区。记入国际兽疫局(OIE)名录中的水生动物病害有30多种,其中85%以上是病毒病。近年来,各个国家要求检疫的病害种类越来越多,相关技术也在不断提高。我国对水生动物疫病的研究,往往是在疫病已经暴发或对养殖业造成了相当大的危害后才开始,长期以来由于缺乏有效和规范的检测方法,无法对这些疫病的发生进行有效监测和预警,因此,对水生动物疫病病原进行研究和建立相应的检测方法迫在眉睫。

“主要水生动物疫病病原学及检疫技术研究”属于国家质检总局科技计划项目,由深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心承担项目组在研究国内外相关技术的基础上,以威胁我国养殖业发展的主要水生动物病原作为研究对象,在病原学和基因组学研究的基础上,建立了16种水生动物疫病的PCR或荧光PCR检测方法以及高通量多重PCR检测新技术,并制订了相关标准,弥补了国内在水生动物疫病检测技术方面的空白。2002年以来,相关技术成果广泛应用于国家农业疫病防控部门,为国内水产养殖业的健康发展提供了保障,促进了我国对外水产贸易的发展。该项目成果曾获得2013年度中国水产学会范蠡科学技术奖二等奖

一、主要研究内容

1.在国内分离出鲤春病毒血症病毒(SVCV)毒株,对所分离毒株的理化特性进行了研究,对SVCV国内分离株进行了分子进化方面的研究,用酵母表达系统对SVCV国内分离株糖蛋白基因进行了表达,对SVCV国内分离株进行了基因组序列的测定和解析、细胞凋亡的初步研究以及细胞凋亡和RNA干扰的初步研究,建立了SVCV实时荧光PCR检测技术。

2KHV的分离和鉴定。开展了KHV的流行病学调查,实施了KHV在国内感染情况的监测活动,建立了KHV实时荧光PCR检测方法,研发了KHV PCR快速检测试剂盒。

3.建立了16种主要水生动物病毒高通量多重PCR和多重荧光PCR检测平台,研发了相关检测试剂盒。

二、主要科技创新

1.鲤春病毒血症病毒(SVCV)和锦鲤疱疹病毒(KHV)的分子生物学研究以及检测试剂盒的研制和疫情调查

1)首次在国内从发病鲤鱼分离出鲤春病毒血症病毒的毒株,研究了SVCV毒株的敏感细胞和病毒粒子的理化特性及患鲤春病毒血症的鱼的组织病理学特点;对国内分离株的全基因组进行测序和功能基因的解析;对国内分离株进行了分子进化方面的研究;研究了病毒毒株感染宿主细胞的特性和引起细胞凋亡的机理;对病毒的囊膜糖蛋白基因进行了真核系统的表达,生产的蛋白为建立免疫学检测方法奠定了基础。

2)首次从国内发病鱼体分离出锦鲤疱疹病毒;开展了锦鲤疱疹病毒在国内养殖场的流行病学研究和锦鲤疱疹病毒病的监测工作;在国内建立了锦鲤疱疹病毒PCR和荧光PCR的检测技术。

2.病原检测的荧光PCR技术和多重荧光PCR技术

1)在国内首次建立了鲤春病毒血症病毒、锦鲤疱疹病毒、鱼传染性造血器官坏死病毒、虹彩病毒蛙病毒属、鱼类神经坏死病毒、斑点叉尾鮰病毒、杀鲑气单胞菌、鲑鱼肾杆菌、对虾白斑综合症病毒、对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒、对虾Taura综合症病毒和对虾黄头病毒的实时定量RT-PCR检测方法,涉及种鱼类病毒病、种鱼类细菌病和种虾病毒病。

2)在国内首次建立了同时检测病毒性出血性败血症病毒、鱼传染性造血器官坏死症病毒、传染性胰脏坏死症病毒三种鱼类病毒病的多重荧光PCR检测技术,同时检测病毒性出血性败血症病毒、鱼传染性造血器官坏死症病毒、传染性胰脏坏死症病毒三种鱼类弹状病毒的多重荧光PCR检测技术,同时检测流行性造血器官坏死病毒、真鲷虹彩病毒、锦鲤疱疹病毒三种鱼类DNA病毒的多重荧光PCR检测技术,同时检测对虾白斑综合症病毒、对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒两种虾病毒的多重荧光PCR检测技术。

三、社会经济效益

项目在水生动物主要疫病病原快速和实时检测技术方面填补了国内多项空白。建立的16种主要水生动物病毒高通量多重PCR和多重荧光PCR检测平台,使整个检验周期缩短80 %以上,降低检测成本50 %以上,大大提高了通关速度,满足了现代检验检疫方法向高通量发展的要求。项目成果已经广泛应用于全国质检部门、农业部门、养殖场、渔业部门等技术执法部门和企业内部控制,为质量监督检验检疫部门守国门把场门提供了重要的技术手段,成为农业部门开展疫病监测计划的有力工具,在我国防止外来疫病入侵工作中发挥了重要作用。

截止到2007年,为各级企事业单位节省经济费用超过1000万。利用项目成果开展全国出口鱼养殖场和部分养殖场疫情监测和流行病学调查,实现了对水生生物高发疫病的有效预警和防控,减少了疫病暴发,所产生的经济效益不可估量。此外,根据项目成果制订的水生动物疫病检测行业标准和国家标准,在全国范围广泛使用,在消除技术性贸易壁垒,促进水生动物贸易发展方面发挥了重要作用。由于深圳出入境检验检疫局水生动物疫病检测实验室在检测技术方面的突出贡献,国际动物卫生组织(OIE)批准该实验室成为中国大陆首个OIE鱼病参考实验室(鲤春病毒血症OIE参考实验室)。